活性氧对DA1/DA1m转基因BY2细胞活性的影响
褚艳霞，周树敏，郑帮，孙虎林，郑雅洁，司英语，张卫*
上海大学，生命科学学院，上海市能源作物育种与应用重点实验室，上海，200444
摘要
已知拟南芥中DA1基因通过调控细胞的分裂活动，影响器官组成细胞的数量，从而控制了种子和器官最终的大小。细胞在代谢过程中会产生一系列活性氧簇 reactive oxygen species (ROS)，不同浓度的ROS作为信号可调控细胞进行分裂、分化和死亡等不同的生理活动。我们利用农杆菌侵染转化法，将DA1和DA1m基因转入BY2 细胞，并对转化后细胞分别使用5µmol/L，10µmol/L，15µmol/L，25µmol/L，50µmol /L menadione处理，以研究细胞的活性状态。结果显示在5µmol/L和10µmol/L menadione处理时，转基因细胞增殖显著加快，且35S:DA1m转基因细胞数量增加大于35S:DA1转基因细胞，同时两种类型转基因细胞均未表现出受ROS胁迫的反应，细胞外型长宽相近。但15µmol/L，25µmol/L和50µmol /L menadione处理时，细胞数量增速变缓，35S:DA1转基因细胞数量显著大于35S:DA1m转基因细胞；通过Evens blue染色显示，35S:DA1m转基因细胞的死亡率明显大于35S:DA1转基因细胞，且数量众多的细胞显著伸长。以上结果表明，低浓度ROS对35S:DA1和35S:DA1m转基因细胞均有促进分裂的效应，且DA1m对ROS更敏感；高浓度ROS诱导细胞死亡， 但35S:DA1转基因细胞对ROS的耐受能力明显较强。目前的这些研究结果对我们正在研究的DA1基因与细胞分裂和分化，及其与ROS的关系，将是十分有利的前期工作积累。
关键词: DA1, DA1m, BY2细胞, ROS
